腺病毒包装服务
介绍
腺病毒是一种线性双链DNA病毒,其具有感染范围广且对人致病性低;病毒滴度高;不整合基因组,无染色体插入突变;外源基因载量大等优点,从而使得重组腺病毒被广泛应用于基础科研与临床研究等领域中,已成为世界上最广泛应用的基因治疗系统之一。
腺病毒包装的优点:
1.宿主广泛,对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用
2. 无需任何转染试剂,操作简单
3. 适合质粒转染效率低的细胞,如原代细胞、神经细胞等
4. 可以插入10K以内的外源基因
5. 无染色体插入突变
服务项目
公司提供2种较常用的腺病毒系统(AdEasy、AdMAX)相关上下游服务。
AdEasy系统:
AdEasy包装系统是利用Cre/loxP系统在大肠杆菌(BJ5183)中完成外源基因插入腺病毒基因组的过程,获得环状的重组腺病毒基因组,并且具有在细菌中复制的必需元件。将重组腺病毒基因组酶切线性化后转染HEK293细胞,避免了双质粒共转染得到重组腺病毒。科研者可根据不同的研究方向,构建各种类型的重组腺病毒穿梭质粒,例如shRNA腺病毒载体、基因过表达的腺病毒载体等。
图片AdMAX系统:
AdMax包装系统是通过Cre/loxP 获得重组病毒,这个过程发生在HEK293细胞中,从而避免在细菌中重组。将携带了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒基因组的包装质粒共转染包装细胞,借助Cre/loxP系统的作用实现重组,产生重组腺病毒。该系统有多种优势,例如较前者系统重组效率更高、操作更简便,实现快速高效的病毒包装流程。科研者可以根据不同的研究方向,构建各种类型的重组腺病毒穿梭质粒,例如shRNA腺病毒载体、基因过表达的腺病毒载体等。
图片服务技术路线
1. 构建腺病毒载体:使用基因合成,退火,克隆等相关分子生物学技术
2. 表达载体质粒和包装质粒在不同宿主细胞中重组
3. 感染HEK293,包装出病毒,并进行扩增与浓缩
4. 滴度测定
5. 支原体检测
案例展示
图片服务说明
1. 基因克隆相关信息需要客户准确提供
2. 客户在订单确认前需确认使用哪套病毒系统
3. 目的基因片段越长,病毒滴度越低,建议基因长度不要超过5kb
4. 功能验证需另外收费。
产品发货清单
1. 腺病毒质粒及菌株
2. 提供至少1ml滴度>10^10PFU/ml的病毒,难度基因除外
3. COA发货报告