稳定细胞系构建
简介
将外源DNA克隆到某种抗性的真核表达载体上，载体通过不同的转染方式转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，使宿主细胞能够长期稳定表达目的蛋白，该过程称为稳定细胞株构建。该平台弥补了瞬时转染实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于直接使用在各种下游的生物学研究，包括基因调控、蛋白质工程、重组抗体制备、药物研发等，可进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究或需要进行大规模蛋白合成。实验中常用的抗性筛选标记物有嘌呤霉素(puromycin)、潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)、灭稻瘟素(Blasticidin)等，通常用G418来代替新霉素进行选择性筛选。
实验平台介绍
（1） 目的基因的蛋白过表达
目的基因的蛋白表达是研究该基因功能的常规手段及必要工具。通过稳定细胞株来大量的表达目的蛋白能够大大提高基因功能实验的研究效率。朗晶生物可以使用真核表达载体/慢病毒系统，将目的基因CDS部分导入到质粒/病毒中，通过转染/感染各类宿主细胞，从而将目的基因整合到该宿主的基因组中，并利用抗生素筛选，获得稳定表达的高拷贝单克隆株。
技术流程：
1. 载体构建（表达/病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. 目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
（2）目的基因的蛋白沉默
目的基因的蛋白沉默（knock-down or knock-out）是研究该基因功能的常规手段及必要工具。朗晶生物可以使用真核表达载体/慢病毒系统，将目的基因对应的shRNA/microRNA导入到质粒/病毒中，通过转染/感染各类宿主细胞，从而将目的基因整合到该宿主的基因组中，并利用抗生素筛选，获得高效沉默的高拷贝单克隆株。
技术流程：
1. 载体构建（沉默/病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. 目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. 目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
（3）诱导系统
外源目的基因的蛋白诱导表达/沉默可以在特定的时间或特定的组织、细胞类型内调控基因蛋白表达水平，能够更好的理解目的基因/蛋白的作用机理，特别适合研究自身具有毒性的蛋白。朗晶生物可以构建含有“开关”控制表达/沉默目的基因的质粒/病毒，通过转染/感染各类宿主细胞并稳定整合进细胞基因组，利用抗生素筛选，得到可诱导的稳定单细胞克隆。
技术流程:
1. 载体构建（诱导质粒/病毒载体）；
2. 转染/感染；
3. “开关”诱导下目的蛋白初步检测；
4. 抗生素筛选；
5. “开关”目的蛋白再次检测（定性/半定量）；
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
服务说明
1. 因为宿主细胞各不一样，导致实验方案差异较大，所以需要客户提前提供相关宿主信息，并安排预实验确定宿主转染方案
2. 基因克隆相关信息需要客户准确提供
3. 功能验证需另外收费
产品发货清单
1. 含目的基因序列/沉默序列/诱导序列的质粒/病毒；
2. 稳定细胞株2管；
3. COA发货报告